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產(chǎn)品說明：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有裂解作用。根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度不同，大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。

本品為裂解性較溫和的1 x RIPA裂解液，主要成分為50mM Tris-HCl (pH 7.4) , 150mM NaCl, 1% NP- 40,1%脫氧膽酸鈉，0.25% 脫氧膽酸鈉，以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑，可廣諧且有效抑制蛋白降解，經(jīng)本品裂解所得的蛋白樣品，適用于蛋白免疫印跡(Western Blot) , 兔疫沉淀(IP) 等實(shí)驗(yàn)。經(jīng)本品裂解收集的蛋白樣品，可使用增強(qiáng)型BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑，不適合用Bradford法來測(cè)定總蛋白濃度。

保存：-20℃凍存，有效期一年

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸

產(chǎn)品組成：

使用說明：

一、細(xì)胞樣品
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

二、組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。

3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6.  如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

【注】RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

注意事項(xiàng)：

1）為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。