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產(chǎn)品說明：

使用說明：

基本描述:

5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid, 5-FOA)用于酵母負(fù)選擇是一種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質(zhì)粒清除、質(zhì)粒穿梭、 等位置換和雙雜交篩選都會(huì)用到5-FOA。5-FOA自身對(duì)酵母細(xì)胞無(wú)毒，但功能型URA3基因能編碼表達(dá)乳清酸核苷-5'-單磷酸脫羧酶(OMP脫羧酶)，將其轉(zhuǎn)化為有毒形式(如5-氟尿嘧啶)，從而使得酵母細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)。

因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養(yǎng)基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能正常生長(zhǎng)。5-FOA主要用于融酒酵母Saccharomyces cerevisiae (URA3) 的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括要酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe (URA4 and URA5)。白色念珠菌Candidaalbicans (URA3)和大腸桿菌E. coli (pyrF) 。酵母雙雜交系統(tǒng)中5-FOA的使用允許構(gòu)建激活結(jié)構(gòu)域雜交文庫(kù)來(lái)鑒定蛋白-蛋白相互作用。

使用方法
一.5-FOA培養(yǎng)基配置方法(以粉末形式)
       1.1配制400ml標(biāo)準(zhǔn)的酵母合成培養(yǎng)基，并加入1g 5-FOA 粉末，充分溶解混勻，0.22μm濾膜過滹除菌。[或者可當(dāng)高 壓滅菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基冷卻到55°C后再加入1g 5-FOA粉末，然后過濾除菌。]

       1.2高壓滅菌瓊脂粉/水混合液(濃度為20g/600ml)，使其冷卻到55℃

       1.3將溫?zé)岬?-FOA培養(yǎng)液倒入瓊脂粉/水溶液內(nèi)，攪勻后，倒平板。

二、5-FOA培養(yǎng)基配置方法(以儲(chǔ)存液形式)
      2.1取100mg 5-FOA凍干粉，用1ml無(wú)水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml (100x) 的儲(chǔ)存液。短期頻繁使用，置于4℃避光保存;長(zhǎng)期保存，根據(jù)單次用量分裝凍存，-20℃保存6個(gè)月有效。
      2.2根據(jù)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的方法,配制標(biāo)準(zhǔn)的酵母合成培養(yǎng)基(含瓊脂粉)，高壓滅菌。放入轉(zhuǎn)子一起滅菌以便后續(xù)攪勻組分用。

2.3冷卻到55℃后加入任何熱敏感組分(氨基酸，糖類或者其他成分) .

2.4每升培養(yǎng)基加10ml 100x 5-FOA儲(chǔ)存液，混勻后，倒平板。

注意事項(xiàng)：

1、5-FOA微溶于水，粉末溶解過程中可加熱(如55-65℃) 助溶30min~1h直至完全溶解。5-FOA極易溶于DMSO,但高濃度DMSO對(duì)細(xì)胞有毒，需注意控制DMSO的終濃度。
     2、5-FOA培養(yǎng)基不用調(diào)節(jié)pH。
     3、5- FOA培養(yǎng)基平板置于4℃避光保存，可存放3個(gè)月，建議用封口膜封口四周

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。