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產(chǎn)品說明：

使用說明：

產(chǎn)品描述：

細胞膜熒光探針DiD，DiA，DiI，DiO，DiD和DiR染料是用于標記細胞膜和其他疏水結構的親脂熒光染料家族。當摻入膜中或與親脂性生物分子如蛋白質結合時，這些對環(huán)境敏感的染料的熒光大大增強，盡管它們在水中是弱熒光的。它們具有高消光系數(shù)，極性依賴性熒光和短激發(fā)態(tài)壽命。一旦應用于細胞，這些染料在細胞質膜內(nèi)橫向擴散，導致整個細胞在其最佳濃度下均勻染色。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特熒光顏色為活細胞的多色成像和流式細胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分別與標準FITC和TRITC過濾器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射波長，為標記具有顯著內(nèi)在熒光的細胞和組織提供了有價值的替代方案。由于紅外光通過細胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內(nèi)的低水平自發(fā)熒光，DiR可用于體內(nèi)成像或示蹤。

本品為DiD的高氯酸鹽形式提供，純度≥95%，適用于熒光檢測研究。

使用步驟：

一、染液制備

1）制備DMSO或EtOH儲備溶液：儲備溶液應在DMSO或EtOH中以1-5mM制備。
注意：儲備溶液的未使用部分應儲存在-20℃。 避免反復凍/融循環(huán)。
2）準備工作溶液：將儲備溶液（步驟1）稀釋到合適的緩沖液中，如無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS，制成1至5mM的工作溶液。
注意：對于不同的細胞類型和/或實驗條件，應根據(jù)經(jīng)驗確定工作溶液的最終濃度。 建議在至少超過十倍范圍的濃度下進行測試。

二、將細胞染成懸浮液：
1）在染料工作溶液中懸浮細胞密度為1×106 / mL（來自步驟1.2）。
2）在37°C孵育2-20分鐘。 最佳培養(yǎng)時間取決于細胞類型。 首先孵育20分鐘，然后根據(jù)需要進行優(yōu)化以獲得均勻的標記。
3）將標記的懸浮管以1000至1500rpm離心5分鐘。
4）去除上清液，輕輕地將細胞重新懸浮在預熱（37°C）的生長培養(yǎng)基中。
5）按步驟3和4洗滌兩次。

三、染色貼壁細胞：
1）在無菌玻璃蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細胞。
2）從生長培養(yǎng)基中取出蓋玻片，輕輕地排出多余的培養(yǎng)基。 將蓋玻片放在濕度箱中。
3）將100μL染料工作溶液（來自步驟1.2）吸移到蓋玻片的角落，輕輕攪拌直至所有細胞都被覆蓋。
4）將蓋玻片在37°C孵育2-20分鐘。 最佳培養(yǎng)時間根據(jù)細胞類型而變化。開始孵育20分鐘，然后根據(jù)需要進行優(yōu)化以獲得均勻的標記。
5）排出染料工作溶液，用生長培養(yǎng)基清洗蓋玻片兩到三次。 對于每個洗滌循環(huán)，用預熱的生長培養(yǎng)基覆蓋細胞，孵育5-10分鐘，然后排出培養(yǎng)基。

四、顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiS和DiR濾光器選擇參考下表

2）對于同時檢測多種染料，可提供如下多波段濾波器組：
a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004
b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007
c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細胞儀檢測：
用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR標記的細胞可分別使用常規(guī)FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測通道進行分析。

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并帶一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。